Презентация на тему: Тақырыбы: ИФТ әдісі

Тақырыбы: ИФТ әдісі
Жоспары
Иммундық ферментті талдау (сараптама) – антиденелер мен антигендерді сандық және сапалық анықтау иммунологиялық зертханалық әдісі
70- шы жылдардың басында ИФТ әдісін ашқан ғалымдар: Швеция ғалымдары – Engvall және Perlmann Нидерланд ғалымдары - van Weemen және Schuur, АҚШ ғалымы -
ELISA ( enzyme linked immunosorbent assay ) –
Әдіс антиген мен оған сәйкес антидене арасындағы спецификалық әрекеттесу принципімен жасалады. Комплексті анықтау үшін ферментті белгімен ( пероксидаза,
Спецификалық антиденелерді анықтау әдісі (сэндвич әдісі)
Антиденелерді анықтауға арналған иммуноферментті сынама - жүйелерінің түрлері:
Иммуноферментті талдаудың түрлері:
Иммуноферментті талдаудың түрлері:
Бұл схемада антигендер ( 2 ) планшеттің ойықтарына ( 1 ) орнатылған. Ойыққа зерттелетін сары су енгізіледі. Егер сары суда антигендерге қарсы антиденелер ( 3 )
Планшеттің ойықтарын байланыспаған субстанциялардан (яғни спецификалық емес антиденелерден) тазалап, оған екінші антиденелер ( 4 ) қосылады. Бұл антиденелерге
Планшеттің ойықтарын байланыспаған конъюгаттан тазалап, оған түссіз субстрат ( 5 ) қосылады, бұл субстратқа фермент (Е) әсер етіп, оны бояйды (6).
ИФТ жүргізу схемасы
Иммуноферментті талдаудың қолданылуы:
ИФТ нәтижелерін бағалау
Диагностика кезінде ескеру керек:
ELISPOT ( enzyme linked immunosorbent assay spots ) Кейс университетінің (Кливленд, Огайо штаты) ғалымдары және STL Analyzers LLS компаниясының қызметкерлері
Техникасы:
Техникасы:
Қорытынды Иммуноферментті талдаудың артықшылықтары:
Қолданылған әдебиеттер
Тақырыбы: ИФТ әдісі
1/23
Средняя оценка: 4.2/5 (всего оценок: 42)
Код скопирован в буфер обмена
Скачать (1515 Кб)
1

Первый слайд презентации: Тақырыбы: ИФТ әдісі

Қарағанды Мемлекеттік Медицина университеті Иммунология және Аллергология кафедрасы Орындаған: Ағайдарова Ақтолқын 2-027 топ Тексерген : Әбуова Ғ.Т. Қарағанды 2018

Изображение слайда
2

Слайд 2: Жоспары

-Кіріспе -Негізгі бөлім 1.Иммундық ферментті талдау 2.Спецификалық антиденелерді анықтау әдісі (сэндвич әдісі) -Қорытынды Қолданылған әдебиеттер

Изображение слайда
3

Слайд 3: Иммундық ферментті талдау (сараптама) – антиденелер мен антигендерді сандық және сапалық анықтау иммунологиялық зертханалық әдісі

Изображение слайда
4

Слайд 4: 70- шы жылдардың басында ИФТ әдісін ашқан ғалымдар: Швеция ғалымдары – Engvall және Perlmann Нидерланд ғалымдары - van Weemen және Schuur, АҚШ ғалымы - Rubenstein

Изображение слайда
5

Слайд 5: ELISA ( enzyme linked immunosorbent assay ) –

Изображение слайда
6

Слайд 6: Әдіс антиген мен оған сәйкес антидене арасындағы спецификалық әрекеттесу принципімен жасалады. Комплексті анықтау үшін ферментті белгімен ( пероксидаза, сілтілі фофатаза, глюкозооксидаза, ацетилхолинэстераза, каталаза және т.б.) байланысқан анти - антидене болып табылатын арнайы конъюгат (адам Ig қарсы қоян антиденелері немесе моноклондық антиденелер) қолданылады

Изображение слайда
7

Слайд 7: Спецификалық антиденелерді анықтау әдісі (сэндвич әдісі)

Планшет ойықтарына қоздырғыштың антигені орнатылып, зерттелетін сары сумен бірге инкубацияланады. Спецификалық антиденелер болған жағдайда олар байланысып, антиген - антидене комплексі түзіледі. Одан кейін бұл комплекс конъюгатпен инкубацияланған кезде анти - антиденелер антиген - антидене комплекстерімен байланысады. Ферменттік реакция (түрлі - түсті реакция) сутегі тотығы мен пероксидазды реакция процесінде тотығып, боялатын субстраттың қатысумен жүреді. Боялу қарқыны анықталатын спецификалық антиденелердің санына байланысты болады. Нәтижесі спектрофотометрмен немесе визуалды бағаланады.

Изображение слайда
8

Слайд 8: Антиденелерді анықтауға арналған иммуноферментті сынама - жүйелерінің түрлері:

Лизатты – ульрадыбыспен лизистенген немесе өңделген қоздырғыштар қолданылады Рекомбинантты – қоздырғыштардың гендік - инженерлік тәсілмен алынған антигендік ақуыздары қолданылады Пептидтік – ақуыздардың химиялық жолмен синтезделген фргаменттері қолданылады

Изображение слайда
9

Слайд 9: Иммуноферментті талдаудың түрлері:

Гомогенді ИФТ – сараптаманың барлық кезеңдері суда жүргізіледі Гетерогенді немесе қатты фазалы ИФТ – реакцияның бір компоненті антиген немесе антидене арнайы қатты тасымалдағыштарда – полистрироды планшет немесе пробиркада орнатылады Аралас ИФТ – ақуыздардың химиялық жолмен синтезделген фрагменттері қолданылады

Изображение слайда
10

Слайд 10: Иммуноферментті талдаудың түрлері:

Қарапайым бәсекелес емес (конкурентті емес) ИФТ – бірінші кезеңде жүйеде антигеннің зерттелетін байланысы және байланыс орталықтары бар спецификалық антиденелер болады Күрделі бәсекелес (конкурентті) ИФТ – Зерттелетін байланыспен бірге оның антиденелердегі спецификалық байланыс орталықтарына бәсекелес аналогы болады

Изображение слайда
11

Слайд 11: Бұл схемада антигендер ( 2 ) планшеттің ойықтарына ( 1 ) орнатылған. Ойыққа зерттелетін сары су енгізіледі. Егер сары суда антигендерге қарсы антиденелер ( 3 ) болса, инкубациялану кезінде антиген/антидене байланысы түзіледі

Изображение слайда
12

Слайд 12: Планшеттің ойықтарын байланыспаған субстанциялардан (яғни спецификалық емес антиденелерден) тазалап, оған екінші антиденелер ( 4 ) қосылады. Бұл антиденелерге белсенді фермент (Е) бекітілген. Мұндай комплекстік байланысу конъюгат деп аталады. Инкубациялану кезінде ойықта сэндвич тәрізді құрылым түзіледі

Изображение слайда
13

Слайд 13: Планшеттің ойықтарын байланыспаған конъюгаттан тазалап, оған түссіз субстрат ( 5 ) қосылады, бұл субстратқа фермент (Е) әсер етіп, оны бояйды (6)

Изображение слайда
14

Слайд 14: ИФТ жүргізу схемасы

а – пробирканың қабырғасында белгілі антигенге қарсы антиденелер; б – зерттелуші сары су қосылады, егер онда антигендер болса, олар антиденелермен байланысып, пробирканың қабырғасына бекітіледі; в – белгілі антигенге қарсы ферментпен белгіленген антиденелерді енгізу, олар қабырғадағы иммундық комплекспен байлаынысады; г – сутегі асқын тотығы мен хромогенді қосқанда оттегінің әсерімен сары түске боялады.

Изображение слайда
15

Слайд 15: Иммуноферментті талдаудың қолданылуы:

Жұқпалы ауруларды диагностикалау ( IgA, IgM, IgG антиденелері), аурудың кезеңін анықтау Аутоиммундық ауруларды диагностикалау Аллергияны диагностикалау Гормондарды анықтау Онкомаркерлерді анықтау Цитокиндерді анықтау

Изображение слайда
16

Слайд 16: ИФТ нәтижелерін бағалау

Ауру кезеңі IgM IgA IgG Теріс нәтиже - - - Алғашқы 2 апта - + - 2,5-3 апта + + - 3-4 апта + + + Жазылу кезеңі - Емделгеннен кейін титр дің 2-4 есе төмендеуі Емделгеннен кейін титр дің 4 есе төмендеуі Созылмалы кезең - +\- + Ауру өршуінен кейін 2 аптадан со ң - + + Жазыл ған ауру - - +

Изображение слайда
17

Слайд 17: Диагностика кезінде ескеру керек:

Зерттеуді аурудың ерте кезеңінде өткізу керек. Бір уақытта бірнеше спецификалық антиденелерді анықтаған (немесе IgM және IgG антиденелерін) жөн, бұл біріншілік инфекцияны диагностикалау үшін қажет. Аурудың динамикасын бағалау үшін антиденелердің санын анықтау қажет. Белсенді және жасырын инфекцияны айыру үшін IgG авидтілігі деңгейін сараптау. Бұрын жұқтырылған инфекцияның нәтижесінде антиденелер төмендеген иммунитетте, ақуызды ашығу кезінде анықталмауы мүмкін.

Изображение слайда
18

Слайд 18: ELISPOT ( enzyme linked immunosorbent assay spots ) Кейс университетінің (Кливленд, Огайо штаты) ғалымдары және STL Analyzers LLS компаниясының қызметкерлері алғашқы сараптама анализаторы ашқан мен мәліметтерді өңдеу және есте саұтау үшін бағдарламаламен қамтамасыз еткен

ELISPOT әдісімен Т - және В-жасушаларды сараптау үшін қолданылады. ELIS А әдісінен айырмашылығы гидрофобты мембрананың бетіндегі антиденелер жасушаның белгілі өнімін (цитокиндер) байланыстырады.

Изображение слайда
19

Слайд 19: Техникасы:

Планшет ойықтарына 100 мкл-ден Т -лимфоциттерді енг ізу Планшетті 1 сағат бойы 37 ° С температурада инкубациялау Планшетті екі рет фосфатты - тұзды буфермен шаю Ойықтарға 100 мкл-ден 0,5% бұқа сары су альбумині (БСА) енгізіледі Планшетті 1 сағат бойы 37 ° С температурада инкубациялау Планшетті екі рет фосфатты - тұзды буфермен шаю Ойықтарға лимфоциттердің CD2, CD3, CD4, CD8 маркерлеріне сәйкес 100 мкл-ден моноклондық антиденелер енгізіледі Планшетті 1 сағат бойы 37 ° С температурада инкубациялау

Изображение слайда
20

Слайд 20: Техникасы:

Планшетті екі рет фосфатты - тұзды буфермен шаю Ойықтарға лимфоциттердің 100 мкл-ден қой IgG конъюгаттары (пероксидазамен белгіленген) енгізіледі Планшетті 1 сағат бойы 37 ° С температурада инкубациялау Планшетті екі рет фосфатты - тұзды буфермен шаю Ойықтарға лимфоциттердің 100 мкл-ден субстрат (цитратты буфердағы 0,2% сутегі пероксиді ерітіндісі мен ортофенилендиаминдигидрохлорид ) енгізіледі Планшетті 10 м инут 20 ° С қараңғы жерде инкубациялау Ойықтарға 5 0 мкл-ден 50% күкірт қышқылы (стопреагент) енгізіледі Ойықтардың құрамының рптикалық тығыздығын вертикалді фотометрде өлшеу

Изображение слайда
21

Слайд 21: Қорытынды Иммуноферментті талдаудың артықшылықтары:

Жоғары сезімталдық (ферменттің бір молекуласы) – 70-80% Спецификалы қ – 95% Зерттелуші материалдың ең аз мөлшерін қолдануға болады Реакцияны жүргізу өте қарапайым, оңай Реакцияның барлық кезеңдерін автоматизациялау мүмкіншілігі Экологиялық таза және медперсонал үшін қауіпсіз Диагностикалық жинақтар бағасы арзан

Изображение слайда
22

Слайд 22: Қолданылған әдебиеттер

«Иммунология»: Хайтов Р.М Геотамедия Мәскеу 2015 « Жалпы иммунолгия » : Шортанбаев Ә.Ә, Кожанова С.В Алматы 2008

Изображение слайда
23

Последний слайд презентации: Тақырыбы: ИФТ әдісі

Изображение слайда