Презентация на тему: Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction

Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
История метода
История метода
Использование ПЦР
Применение ПЦР
Основные этапы ПЦР
1) Денатурация ДНК 95°С
2) Отжиг (гибридизация) праймеров Температура отжига зависит от длины и состава праймеров (50 – 70°С)
3) Элонгация 72°С
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
1/19
Средняя оценка: 4.9/5 (всего оценок: 42)
Код скопирован в буфер обмена
Скачать (1034 Кб)
1

Первый слайд презентации: Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction

Изображение слайда
2

Слайд 2: История метода

В 1971 г. норвежский учёный Хьелль Клеппе предложил способ амплификации ДНК с помощью пары коротких одноцепочечных молекул ДНК - синтетических праймеров. ПЦР была изобретена в 1983 году американским биохимиком Кери Муллисом.

Изображение слайда
3

Слайд 3: История метода

Science. 1985. V. 230. P. 1350-1354 Нобелевская премия 1993

Изображение слайда
4

Слайд 4: Использование ПЦР

Год Число публикаций 1985 1 1986 3 1987 8 1988 139 1989 698 1990 2 668 1995 11 890 2000 16 430 2004 20 075

Изображение слайда
5

Слайд 5: Применение ПЦР

Клонирование генов Генотипирование организмов Диагностика наследственных, инфекционных и онкологических заболеваний Идентификация личности и установление родства; криминалистика Анализ древних останков, эволюционная биология Детекция ГМО

Изображение слайда
6

Слайд 6: Основные этапы ПЦР

ДЕНАТУРАЦИЯ ОТЖИГ ПРАЙМЕРА ЭЛОНГАЦИЯ

Изображение слайда
7

Слайд 7: 1) Денатурация ДНК 95°С

H агревание Охлаждение

Изображение слайда
8

Слайд 8: 2) Отжиг (гибридизация) праймеров Температура отжига зависит от длины и состава праймеров (50 – 70°С)

Изображение слайда
9

Слайд 9: 3) Элонгация 72°С

Дезоксирибонуклеозидтрифосфоты ( dATP, dGTP, dCTP, dTTP)

Изображение слайда
10

Слайд 10

Изображение слайда
11

Слайд 11

Увеличение ампликона происходит в геометрической прогрессии

Изображение слайда
12

Слайд 12

ДНК-полимеразы, используемые при проведении ПЦР Termus aquaticus – бактерия, живущая в горячих источниках Йеллоустонского национального парка США при температуре, близкой 85 °С

Изображение слайда
13

Слайд 13

ДНК-полимераза Время активности при 95°С (мин) 5'-3' экзонуклеазная активность (+/-) 3'-5' экзонуклеазная активность (+/-) Taq 40 + - Tth 20 + - Pfu 120 - + Vent 400 - + Deep Vent 1300 - + UlTma 50 - + Pwo 120 - + ДНК-полимеразы, используемые при проведении ПЦР

Изображение слайда
14

Слайд 14

Подбор праймеров Длина праймеров – 18-30 нуклеотидов Содержание GC должно составлять 45-55% Разница в температурах отжига между прямым и обратным праймером не более 5 о С Не должны формировать димеры на 3-концах Не должны формировать шпилек на 3-конце

Изображение слайда
15

Слайд 15

Основные компоненты для проведения ПЦР ДНК-матрица ДНК-полимераза Буфер : - 10 mM Tris-HCl, pH = 8,0-8,8 ; - 50 mM KCl; - 1,5-2.5 mM MgCl 2 Праймеры dNTP

Изображение слайда
16

Слайд 16

Дополнительные компоненты для проведения ПЦР ДМСО (5%) – улучшает амплификацию GC- богатых матриц и отжиг праймеров Формамид (1-5%) – улучшение специфичности реакции Глицерин (1-10%), БСА (0,01-0,1%), Triton X100 (0.05-0.1) – стабилизаторы фермента (NH 4 ) 2 SO 4 (1-10%) – улучшение отжига праймеров

Изображение слайда
17

Слайд 17

Ингибиторы ПЦР

Изображение слайда
18

Слайд 18

95˚ C - 2 мин (горячий старт - денатурация) 2) 94˚С -30 сек (денатурация) 3) 62˚С -45 сек (отжиг) 25-40циклов 4) 72˚С -40 сек (элонгация) 72˚С -3-5 мин (конечная элонгация) Программа для проведения ПЦР

Изображение слайда
19

Последний слайд презентации: Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction

Эффект «выхода на плато» Истощение субстратов ( dNTP и праймеров) Падение активности dNTP и фермента Накопление ингибиторов, например, пирофосфатов и ДНК-дуплексов Конкуренция за реагентов неспецифическими продуктами или праймер-димерами Концентрация специфического продукта и неполная денатурация при высокой концентрации продуктов амплификации.

Изображение слайда