Выполнила: Студентка 2 курса 3 группы ( БФК) Бондарева И.Р
Препаративное центрифугирование – один из методов выделения биологического материала для последующего проведения биохимических исследований. Сфера использования: медицинские, химические и биохимические исследования.
Препаративное центрифугирование может, осуществляется по одной из следующих методик: 1.Дифференциальное. 2.Зонально-скоростное. 3.Изопикническое(или Изоплотностное ) 4. Равновесное
Зонное центрифугирование при условии, что плотность вблизи дна кюветы выше, чем плотность любого из компонентов образца, было названо изопикническим градиентным центрифугированием. Изопикническое центрифугирование проводят как в градиенте плотности, так и обычным путем
1)Если центрифугирование проводится не в градиенте плотности, препарат сначала центрифугируют так, чтобы осели частицы, молекулярный вес которых больше, чем у исследуемых частиц. Эти тяжелые частицы отбрасывают, и образец суспендируют в среде, плотность которой такая же, как и у фракции, которую хотят выделить, а затем центрифугируют до тех пор, пока исследуемые частицы не осядут на дно пробирки, а частицы меньшей плотности не всплывут на поверхность жидкости.
2)Другой способ заключается в наслаивании образца на поверхность раствора с непрерывным градиентом плотности, охватывающим диапазон плотностей всех компонентов смеси.
Методом изоплотностного центрифугирования в градиенте плотности сахарозы проводили разделение компартментов клеток щитка кукурузы. В качестве объектов исследования использовали 4х-дневные щитки кукурузы ( Zea mays ). Изоплотностное центрифугирование осуществляли на центрифуге Beckman (США), в градиенте плотности сахарозы со ступенями 1,3; 1,5; 1,8;2,3; 2,5 М.
Таким образом, было выявлено, что изоцитратлиаза из щитков кукурузы имеет преимущественно глиоксисомальную локализацию, что следует из данных, полученных методом изоплотностного центрифугирования.
Slide-Share