Презентация на тему: Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные

«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные виды нарушений функционирования иммунной системы - иммунодефицитные состояния;
Фронтальный опрос -вопросы
Эволюция методов иммунного анализа- поликлональные и моноклональные антитела
Поликлональные и моноклональные антитела
1975 год: впервые получены моноклональные антитела (МАТ) с помощью гибридомной технологии (Нобелевская премия 1984 года).
Жорж Кёлер и Сезар Мильштейн.   Нобелевская премия за создание моноклональных антител
Биотехнология создания моноклональных антител
Гибридомная технология
Гуманизированные антитела
Эволюция МонАТ: мышиные- химерные-гуманизированные - человеческие
Моноклональные антитела –промышленное производство
Применение моноклональных антител в клинической практике
1.Терапия моноклональными антителами
Псориаз
Псориаз: клинические проявления
«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные
Псориаз: лечение моноклональными антителами
Ревматоидный артрит
Ревматоидный артрит
«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные
Лечение болезни Крона: ведолизумаб
Болезнь Крона: гранулемы в слизистой толстой кишки
«Волшебные пули»: моноклональные антитела в онкологии
Применение моноклональных антител в клинической практике
Иммунный анализ –использование моноклональных антител
«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные
Исследование иммунной системы: иммунограмма и иммунный статус
Исследование иммунной системы: двухуровневый подход
Тесты первого уровня в ыявляют «грубые дефекты» клеточного и гуморального звена врожденного и адаптивного иммунитета:
Тесты первого уровня
Тесты второго уровня
Тесты второго уровня
Тесты второго уровня
Тесты второго уровня
Основные выводы по результатам оценки иммунного статуса:
2. Патологические состояния по результатам оценки иммунного статуса: иммунодефицитные состояния
3. Патологические состояния по результатам оценки иммунного статуса: состояния с повышенной активацией иммунного ответа (аутоиммунные заболевания, аллергия,
Этиологический принцип оценки иммунного статуса- выбор наиболее информативных тестов для оценки иммунного статуса в соответствии с этиологией
Все иммунологические методы, адаптированные к клинической практике, подразделяются на:
Скрининговые методы оценки фагоцитов (нейтрофилов)
Система нейтрофилов: норма
Система нейтрофилов: норма
Уточняющие методы оценки система фагоцитов (нейтрофилов)
CD : кластеры дифференцировки клеток - система картирования поверхностных структур
Скрининговые методы оценки Т- лимфоцитов
Уточняющие методы оценки Т- лимфоцитов
Оценка Т- клеточного звена иммунитета
Скрининговые методы оценки В лимфоцитов
Уточняющие методы оценки В лимфоцитов
«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные
Показатели клеточного иммунитета в зависимости от возраста
Показатели клеточного иммунитета в зависимости от возраста
Методы оценки гуморального звена
ИФА – иммуноферментный анализ
Полистироловый 96 - луночный планшет для иммуноферментного анализа (твердая фаза)
Иммуноферментный анализ: определение антител
Иммуноферментный анализ: определение антител
Иммуноферментный анализ: определение антител
Иммуноферментный анализ: определение антигенов
Иммуноферментный анализ: определение антгенов
Иммуноферментный анализ: определение антигенов
Модификации ИФА
Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста (Ig, г / л)
Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста (Ig, г / л)
Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста ( Ig, г / л)
Иммунные комплексы (АГ-АТ)
Иммунные комплексы
Иммунные комплексы (АГ-АТ)
Состав иммунных комплексов
Уровни иммунных комплексов у здоровых лиц
Определение компонентов системы комплемента в сыворотке крови методом ИФА (мкг/мл)
«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные
Биологический материал для определения концентрации цитокинов ( мультиплексный анализ)
«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные
xMap технология
Схема эксперимента
Приборы для х-МАР технологии
Анализ цитокинов
Диагностические возможности
Метод ИФА - реагенты фирмы Dr.Fooke, Германия
Аллергодиагностика (в том числе в стоматологии)
Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста (Ig Е, МЕ / мл, 1 МЕ/мл = 2.4 нг (1968 г., ВОЗ)
ImmunoCAP® - «золотой стандарт» аллергодиагностики in vitro
ImmunoCAP® : иммунофлюоресцентный метод
Основные принципы оценки иммунограммы
Основные принципы оценки иммунограммы
Основные принципы оценки иммунограммы
Основные виды патологии иммунной системы
Вопросы
Тестовые вопросы
Тестовые вопросы
Тестовые вопросы
Тестовые вопросы
Тестовые вопросы
«Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные
1/95
Средняя оценка: 4.4/5 (всего оценок: 22)
Код скопирован в буфер обмена
Скачать (3604 Кб)
1

Первый слайд презентации: Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные виды нарушений функционирования иммунной системы - иммунодефицитные состояния; аутоиммунная патология; аллергия»

Цикл 1 - иммунология. Занятие № 10

Изображение слайда
2

Слайд 2: Фронтальный опрос -вопросы

Какие звенья иммунной системы изучаются в клинической практике? Какие методы иммунного анализа вам известны? Как происходила эволюция методов иммунного анализа? Каковы основные принципы оценки иммунограммы? Каковы возрастные особенности иммунологических показателей? Дайте определение понятию «иммунодефицитные состояния». Какие механизмы лежат в основе развития аутоиммунной патологии? Какие виды гиперчувствительности Вам известны?

Изображение слайда
3

Слайд 3: Эволюция методов иммунного анализа- поликлональные и моноклональные антитела

При введении антигена в организме вырабатывается большое семейство антител, направленных к разным его эпитопам. К одному и тому же эпитопу антигена также может образоваться целый спектр антител, отличающихся по структуре, степени специфичности и прочности связывания с эпитопом (это относится как к белковым, так и к полисахаридным антигенам).

Изображение слайда
4

Слайд 4: Поликлональные и моноклональные антитела

Поликлональные антитела В ответ на введение антигена в организме образуются многокомпонентные смеси антител к различным эпитопам антигена – поликлональные антитела, которые производят различные клоны клеток. Эти антитела которые широко используются для нейтрализации бактериальных токсинов (дифтерийного, столбнячного), змеиных ядов (кобры, гадюки), вирусов, попавших в кровь (особенно эффективно для вируса кори). Моноклональные антитела Антитела, вырабатываемые одним клоном клеток и направленные лишь к одной детерминанте антигена. Именно моноклональные антитела используются в современные методах диагностики и терапии, так как они обеспечивают абсолютную специфичность в распознавании данного анти гена.

Изображение слайда
5

Слайд 5: 1975 год: впервые получены моноклональные антитела (МАТ) с помощью гибридомной технологии (Нобелевская премия 1984 года)

Моноклональные антитела Иммуноглобулины, синтезируемые одним клоном клеток. Моноклональное антитело связывается только с одной антигенной детерминантой на молекуле антигена. Гибридомная технология Слияние с помощью полиэтиленгликоля лимфоцитов селезенки предварительно иммунизированных организмов определенным антигеном с раковыми клетками, способными к бесконечному делению. Отбирают клоны клеток, синтезирующие необходимые антитела. Гибридомы - бессмертные клоны клеток, синтезирующие моноклональные антитела.

Изображение слайда
6

Слайд 6: Жорж Кёлер и Сезар Мильштейн.   Нобелевская премия за создание моноклональных антител

Идея состояла в том, чтобы взять линию миеломных клеток, которые потеряли способность синтезировать свои собственные антитела и слить такую клетку с нормальным В –лимфоцитом, синтезирующим антитела, с тем, чтобы после слияния отобрать образовавшиеся гибридные клетки, синтезирующие нужное антитело. Гибридомная технология позволяет получить соматический гибрид нормальной антителообразующей и опухолевой клеток ( гибридóма ) дает потомство, обладающее бессмертием опухолевой клетки и способностью к синтезу антител, унаследованному от клетки нормальной. Гибридомы продуцируют огромное количество моноклональных антител, обладающих уникальной специфичностью.

Изображение слайда
7

Слайд 7: Биотехнология создания моноклональных антител

Животное иммунизируют, в ответ на введение антигена в организме мыши активизируются продуцирующие антитела потомки В-лимфоцитов. Эти клетки могут жить только в организме хозяина, при переводе на искусственную питательную среду они гибнут. Если слить иммунную клетку с опухолевой, образуются гибридные клетки, способные неограниченно долго жить в искусственных средах. Одновременно они сохраняют способность синтезировать антитела.

Изображение слайда
8

Слайд 8: Гибридомная технология

Изображение слайда
9

Слайд 9: Гуманизированные антитела

Мышиные лимфоциты синтезируют мышиные иммуноглобулины, введение таких моноклональных антител человеку вызывало иммунную реакцию отторжения. В 1988 году Грег Винтер разработал специальную методику гуманизации моноклональных антител - замена в составе моноклональных антител белков мыши белковыми компонентами человека - химерные ( гуманизированные ) антитела.

Изображение слайда
10

Слайд 10: Эволюция МонАТ: мышиные- химерные-гуманизированные - человеческие

Изображение слайда
11

Слайд 11: Моноклональные антитела –промышленное производство

Изображение слайда
12

Слайд 12: Применение моноклональных антител в клинической практике

1.Терапия с использованием моноклональных антител (антицитокиновая терапия; анти - IgE –терапия и др.). 2. Диагностические методы определения любых молекул (иммунный анализ).

Изображение слайда
13

Слайд 13: 1.Терапия моноклональными антителами

Изображение слайда
14

Слайд 14: Псориаз

Возможными кандидатами на аутоантигены при псориазе являются кератин 13, гетерогенный ядерный нуклеопротеин-1. Однако, точно аутоантигены при псориазе не установлены. Считается, что это –аутоантигены кожи.

Изображение слайда
15

Слайд 15: Псориаз: клинические проявления

Изображение слайда
16

Слайд 16

Изображение слайда
17

Слайд 17: Псориаз: лечение моноклональными антителами

Активно используются для лечения псориаза, следующие препараты мононоклональных антител: инфликсимаб (препарат Ремикейд ), блокада TNF-альфа; адалимумаб (препарат Хумира ), блокада TNF-альфа; устекинумаб (препарат Стелара ), блокада действия IL-23 и IL-12, блокада активации Т-клеток.

Изображение слайда
18

Слайд 18: Ревматоидный артрит

Иммунное воспаление в суставах приводит к появлению на суставных поверхностях костей эрозий, что в дальнейшем становится причиной развития выраженных суставных деформаций. Возможные этиологическаие факторы: Вирус Эпштейна-Барр, стрептококки группы В. (антигенная мимикрия: компоненты микробных и вирусных тел имеют сродство к тканях суставов, способны длительное время накапливаться в них и вызывать развитие воспаления).

Изображение слайда
19

Слайд 19: Ревматоидный артрит

Изображение слайда
20

Слайд 20

Основные провоспалительные цитокины, участвующие в патогенезе РА Антицитокиновые препараты для терапии ФНО МАТ – инфликсимаб ( гуманизированные ) - адалимумаб (человеческие) Химерный рецептор - этанерсепт ИЛ-1 Рецепторный антагонист ИЛ-1 МАТ ИЛ-6 МАТ против рецептора ИЛ-6 ( тоцилизумаб ) ИЛ-17 МАТ в разработке АНТИЦИТОКИНОВАЯ ТЕРАПИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА

Изображение слайда
21

Слайд 21: Лечение болезни Крона: ведолизумаб

Болезнь Крона - хроническое рецидивирующее воспалительное заболевание ЖКТ с поражением слизистой оболочки и подслизистого слоя и образованием гранулем. Механизм патогенеза – ГЗТ. Современная терапия: Ведолизумаб - - гуманизированное моноклональное антитело, связывающееся с интегрин-альфа4-бета7 - белком клеточной мембраны, ответственным за миграцию лейкоцитов в слизистую оболочку кишечника, и тем самым блокирующее чрезмерную воспалительную реакцию в этой области.

Изображение слайда
22

Слайд 22: Болезнь Крона: гранулемы в слизистой толстой кишки

Изображение слайда
23

Слайд 23: Волшебные пули»: моноклональные антитела в онкологии

Алемтузумаб (Кэмпас) — препарата для терапии хронического лимфолейкоза. Вариабельный регион ( Fab- фрагмент ) алемтузумаба соединяется с антигеном CD52 на поверхности лимфоцитов, а константный регион ( Fc – фрагмент) - с Fc-рецепторами на поверхности цитотоксических клеток, которые уничтожают мишень (антителозависимая клеточная цитотоксичность). Кэмпас активирует систему комплемента, что приводит к образованию комплекса, разрушающего мембрану злокачественной клетки (комплемент-зависимая цитотоксичность). Именно эти два механизма, а также индукция апоптоза считаются основными в действии данных антител,

Изображение слайда
24

Слайд 24: Применение моноклональных антител в клинической практике

2. Диагностические методы определения любых молекул (точные методы иммунного анализа). (ранее для определения лимфоцитов использовали методы розеткообразования с эритроцитами барана)

Изображение слайда
25

Слайд 25: Иммунный анализ –использование моноклональных антител

Для выполнения иммунного анализа используются моноклональные антитела, созданные к определенным антигенам. После образования иммунного комплекса (АГ-АТ) с помощью большого разнообразия методов производится визуализация комплекса АГ-АТ с последующим определением количества искомого вещества ( антигенов или антител ).

Изображение слайда
26

Слайд 26

Изображение слайда
27

Слайд 27: Исследование иммунной системы: иммунограмма и иммунный статус

Иммунограмма Карта первичного обследования иммунного статуса, отражающая основные показатели тестов оценки иммунной системы человека. Иммунный статус Комплекс количественных и функциональных показателей, отражающих конкретное состояние иммунной системы человека в данный момент времени, определяемое с помощью стандартизированных и разрешенных методов.

Изображение слайда
28

Слайд 28: Исследование иммунной системы: двухуровневый подход

Тесты первого уровня Ориентировочные, легкодоступные, выполняются в лечебных учреждениях общего профиля, не требуют дорогостоящего оборудования и реактивов. Тесты второго уровня Более углубленное исследование состояния иммунной системы в специализированных иммунологических лабораториях, требующие дорогостоящей аппататуры, реактивов, обученного персонала.

Изображение слайда
29

Слайд 29: Тесты первого уровня в ыявляют «грубые дефекты» клеточного и гуморального звена врожденного и адаптивного иммунитета:

Определение абсолютного и относительного числа лейкоцитов и лимфоцитов крови (клинический анализ крови) 2.Определение абсолютного и относительного числа: Т лимфоцитов ( CD 3+) ; В лимфоцитов ( CD 19 +) ; NK (натуральных киллеров ) ( CD 16 / CD 5 6 +).

Изображение слайда
30

Слайд 30: Тесты первого уровня

3. Оценка субпопуляций Т лимфоцитов: CD 4 + -Т-хелперы; CD 8 + Т цитотоксический; отношение CD 4 +/ CD 8 + - иммунорегуляторный индекс. 4.Определение концентраций сывороточных иммуноглобулинов классов M ; G ; A. 5.Оценка фагоцитарной активности моноцитов и нейтрофилов. 6. Оценка бактерицидной активности фагоцитов ( выработка кислородных радикалов ). 7. Оценка активности системы комплемента.

Изображение слайда
31

Слайд 31: Тесты второго уровня

В зависимости от задач, стоящих перед лечащим врачом, тесты второго уровня могут варьировать. Цель выполнения тестов второго уровня- выявить причины иммунологических нарушений, выявленных с помощью тестов первого уровня.

Изображение слайда
32

Слайд 32: Тесты второго уровня

Определение числа Т хелперов 1,2,17 типов. Определение числа Т регуляторных лимфоцитов (естественных и индуцибельных ). Определение числа γδ Т–лимфоцитов. 4. В онкогематологии : определение фенотипа клеток на разных стадиях иммунопоэза (для уточнения стадии малигнизации ). 5. Определение маркеров активации клеток: CD25 ; CD 69; CD 71; HLA-DR.

Изображение слайда
33

Слайд 33: Тесты второго уровня

7. Оценка пролиферативного ответа Т и В-лимфоцитов на митогены (поликлональные активаторы) или на конкретные антигены. 8. Изучение апоптоза в культуре лимфоцитов. 9. Определение цитокинов. 10. Различные этапы фагоцитоза и рецепторный аппарат фагоцитов. 11. Содержание различных компонентов системы комплемента.

Изображение слайда
34

Слайд 34: Тесты второго уровня

12. Активность киллеров (натуральных киллеров и цитотоксических Т лимфоцитов) с определением гназимов / перфоринов и осуществлением апоптоза через Fas/Fas L. 13. Оценка пролиферативного ответа Т и В-лимфоцитов на митогены (поликлональные активаторы) или на конкретные антигены. 14. Определение классов и подклассов иммуноглобулинов. 15. Определение цитокинов в различных биологических жидкостях.

Изображение слайда
35

Слайд 35: Основные выводы по результатам оценки иммунного статуса:

Без существенных изменений иммунного статуса. 2. С недостаточностью иммунного ответа ( иммунодефицитные состояния). 3. С повышенной активацией иммунного ответа (аутоиммунные заболевания, аллергия, воспаление).

Изображение слайда
36

Слайд 36: 2. Патологические состояния по результатам оценки иммунного статуса: иммунодефицитные состояния

Первичная иммунологическая недостаточность (ПИН) Наследственно - обусловленные дефекты иммунной системы. Вторичная иммунологическая недостаточность (ВИН) Нарушения иммунной системы как у детей, так и у взрослых, не связанные с генетическими дефектами в иммунной системе.

Изображение слайда
37

Слайд 37: 3. Патологические состояния по результатам оценки иммунного статуса: состояния с повышенной активацией иммунного ответа (аутоиммунные заболевания, аллергия, воспаление)

Аутоиммунные заболевания – Заболевания, в основе патогенеза которых лежит иммунный ответ, направленный против антигенов клеток и межклеточного вещества собственного организма. Аутоантигены Антигены собственного организма, не стимулирующие запуск иммунного ответа в норме

Изображение слайда
38

Слайд 38: Этиологический принцип оценки иммунного статуса- выбор наиболее информативных тестов для оценки иммунного статуса в соответствии с этиологией

Вирусная инфекция Система интерферонов. Активность цитотоксических клеток. Определение цитокинов ( TNF- α, IL-12 и др.) Бактериальная инфекция Фагоцитарная и оксидативная активность фагоцитов. Число В-лимфоцитов. Уровни иммуноглобулинов. Активность системы комплемента.

Изображение слайда
39

Слайд 39: Все иммунологические методы, адаптированные к клинической практике, подразделяются на:

Скрининговые Позволяют установить те или иные нарушения функционировании иммунной системы. Уточняющие Позволяют объяснить механизмы таких нарушений.

Изображение слайда
40

Слайд 40: Скрининговые методы оценки фагоцитов (нейтрофилов)

Оценка абсолютного числа нейтрофилов Исследование интенсивности фагоцитоза (Фагоцитарное число – % фагоцитирующих клеток, Фагоцитарный индекс – среднее число частиц, поглощенных одной клеткой). Бактерицидность (по НСТ - тесту или с помощью метода хемилюминесценции).

Изображение слайда
41

Слайд 41: Система нейтрофилов: норма

Функции Показатель Значения у здоровых Адгезионная способность Число клеток, % 40 - 55 Миграционная способность (Индекс миграции, усл.ед.) FMLP 2.6 – 2.8 IL-8 1.7 – 3.0 Поглотительная способность Фагоцитарное число, % 42.0 – 83.0 Фагоцитарный индекс, усл.ед. 3.6 – 8.2

Изображение слайда
42

Слайд 42: Система нейтрофилов: норма

Бактерицид ность Спонтанная Индуциро ванная Индекс НСТ - тест условн.ед. 70 - 120 150 - 200 1.2 – 2.0 Хемилюми несценция mV 0.9 – 2.8 7.2 – 18.5 5 - 8

Изображение слайда
43

Слайд 43: Уточняющие методы оценки система фагоцитов (нейтрофилов)

Оценка интенсивности хемотаксиса (направленной миграции клеток) Исследование адгезионной способности нейтрофилов к пластику, либо исследование интенсивности экспрессии адгезионных молекул на поверхности клетки ( CD11/CD18).

Изображение слайда
44

Слайд 44: CD : кластеры дифференцировки клеток - система картирования поверхностных структур

Изображение слайда
45

Слайд 45: Скрининговые методы оценки Т- лимфоцитов

Определение общего числа лимфоцитов Определение процентного и абсолютного числа зрелых Т-лимфоцитов ( CD3 + клеток) и двух основных популяций – CD4 +(хелперов) и CD8 + (цитотоксических) клеток. Исследование ответа Т-лимфоцитов в реакции бласттрансформации (РБТЛ), либо определение маркеров пролиферации - то есть оценка способности Т клеток к делению ( клональной экспансии).

Изображение слайда
46

Слайд 46: Уточняющие методы оценки Т- лимфоцитов

Определение маркеров активации Т-лимфоцитов – экспрессии CD25 (рецептор к интерлейкину 2) и молекул HLA II класса на поверхностной мембране т лимфоцитов. Исследование продукции цитокинов. Изучение пролиферативного ответа Т лимфоцитов в реакции бласттрансформации на специфические антигены.

Изображение слайда
47

Слайд 47: Оценка Т- клеточного звена иммунитета

Т- клеточный иммунодефицит характеризуется :  CD3+,  CD 4 +,  CD4 + /CD8 +,  CD25 + Активация клеток : CD25 +,  HLA II Аутоиммунный компонент: CD4 + /CD8 + (за счет миграции CD8 + в орган-мишень), CD 16 / 56+

Изображение слайда
48

Слайд 48: Скрининговые методы оценки В лимфоцитов

Определение процентного и абсолютного числа В-лимфоцитов ( CD 19+ клеток). Определение уровней «неспецифических» иммуноглобулинов классов А, M, G, E Определение циркулирующих иммунных комплексов. Исследование пролиферативной активности В - лимфоцитов на В - митогены.

Изображение слайда
49

Слайд 49: Уточняющие методы оценки В лимфоцитов

Определение «специфических» (т.е. выработанных на конкретный антиген) иммуноглобулинов классов А, M, G и субклассов G 1-4 Определение продукции цитокинов Определение секреторного иммуноглобулина класса А ( s IgA).

Изображение слайда
50

Слайд 50

Проточная цитометрия : иммунофенотипирование клеток CD 3/ CD 4/ CD 8/ CD 45 CD 3/ CD 19/ CD 16+56/ CD 45

Изображение слайда
51

Слайд 51: Показатели клеточного иммунитета в зависимости от возраста

Возраст 1-3 года 4-6 лет 7-17 лет 18 лет CD3, % CD3, абс. (х10 3/мм) 52 – 56 2.6 – 3.3 61 – 65 2.6 – 3.1 63 – 69 1.8 -3.1 67 -76 1.5 – 2.5 CD 4, % CD 4, абс. 21 – 33 1.0 – 1.9 39 – 51 1.7 – 2.4 39 – 47 0.8 – 2.1 43 – 48 0.4 – 1.6 CD 8, % CD 8, абс. 24 – 28 1.2 – 1.6 23 – 25 0.9 – 1.2 23 – 29 0.5 – 1.3 21 – 26 0.2 – 0.8 CD 4/ CD 8, У.ед. 1.0 – 1.4 1.6 – 2.2 1.4 - 2.0 1.7 – 2.1

Изображение слайда
52

Слайд 52: Показатели клеточного иммунитета в зависимости от возраста

Возраст 1-3 года 4-6 лет 7-17 лет 18 лет CD 16 / 56, % CD 16 / 56, абс. 6 – 17 0.4 – 0.7 6 – 17 0.3 – 0.8 6 – 17 0.1 – 0.8 6 – 17 0.1 – 0.6 CD 20, % CD 20, абс. 21 – 33 0.4 – 0.7 20 – 30 0.3 – 0.8 10 – 14 0.1 – 0.8 2 – 20 0.1 – 0.6

Изображение слайда
53

Слайд 53: Методы оценки гуморального звена

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) основан на реакции антиген-антитело и используется для регистрации либо антигенов, либо антител – в зависимости от задач. Для регистрации комплексов АГ-АТ используются флуоресцентные методы, хемилюминесцентные электрохимические и другие способы визуализации иммунных комплексов.

Изображение слайда
54

Слайд 54: ИФА – иммуноферментный анализ

Основан на взаимодействии антител с антигеном. 2. Уже более 50-ти лет используется для определения различных соединений (как в науке, так и в клинической диагностике). Метод рутинный, с низкой себестоимостью, легок в использовании, имеет множество модификаций в зависимости от задач. 10 000 публикаций ежегодно. В то же время метод имеет ряд ограничений: Требуется довольно большое количество образца. Неспецифическое взаимодействие. В подавляющем большинстве случаев используется фермент-опосредованное усиление сигнала. 4. Ограниченная производительность – 96 луночный планшет.

Изображение слайда
55

Слайд 55: Полистироловый 96 - луночный планшет для иммуноферментного анализа (твердая фаза)

Изображение слайда
56

Слайд 56: Иммуноферментный анализ: определение антител

Изображение слайда
57

Слайд 57: Иммуноферментный анализ: определение антител

Изображение слайда
58

Слайд 58: Иммуноферментный анализ: определение антител

Изображение слайда
59

Слайд 59: Иммуноферментный анализ: определение антигенов

Изображение слайда
60

Слайд 60: Иммуноферментный анализ: определение антгенов

Изображение слайда
61

Слайд 61: Иммуноферментный анализ: определение антигенов

Изображение слайда
62

Слайд 62: Модификации ИФА

Изображение слайда
63

Слайд 63: Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста (Ig, г / л)

возраст Ig A Ig G Ig M 1 месяц 0.02 – 0.50 2.5 – 9.0 0.20 – 0.80 2 – 5 месяцев 0.04 – 0.80 2.0 – 7.0 0.25 – 1.00 6 – 9 месяцев 0.08 – 0.80 2.2 – 9.0 0.36 – 1.00 10 – 12 месяцев 0.15 – 0.90 2.9 – 10.7 0.40 – 1.50

Изображение слайда
64

Слайд 64: Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста (Ig, г / л)

возраст Ig A Ig G Ig M 1 год 0.15 – 1.10 3.4 – 12.0 0.45 – 1.80 2 – 3 года 0.18 – 1.50 4.2 – 12.0 0. 50 – 2.00 4 – 5 лет 0.25 – 1.60 4.6 – 12.4 0.50 – 2.50 6 – 8 лет 0.35 – 2.00 6.5 – 16.0 0.50 – 5.50

Изображение слайда
65

Слайд 65: Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста ( Ig, г / л)

Возраст Ig A Ig G Ig M 9 – 12 лет 0.45 – 2.50 6.5 – 16.0 0. 5 – 2.5 > 12 лет 0.45 – 3.50 6.5 – 16.0 0. 5 – 2.5

Изображение слайда
66

Слайд 66: Иммунные комплексы (АГ-АТ)

Белки комплемента снижают число антигеннных эпитопов (т.е. валентность антигена), с которыми могут связаться антитела. Это приводит к уменьшению размера иммунных комплексов и делает их растворимыми. Такие содержащие компоненты комплемента иммунные комплексы легко связываются с C 3 b -рецепторами на поверхности эритроцитов и выводятся из организма.

Изображение слайда
67

Слайд 67: Иммунные комплексы

Иммунные комплексы, не связанные с эритроцитами, активно поглощаются печенью, затем высвобождаются вновь и откладываются в таких тканях, как кожа, почки, мышцы, вызывая в них воспалительные реакции. Иммунные комплексы, связанные с эритроцитами, реже оказывают повреждающее действие, эффективно элиминируются макрофагами в селезенке и печени. При недостаточности системы комплемента клиренс из организма иммунных комплексов нарушается.

Изображение слайда
68

Слайд 68: Иммунные комплексы (АГ-АТ)

Откладываться иммунные комплексы могут, например, в почечных клубочках, в легочной ткани, вызывая воспалительные реакции. Длительное отложение иммунных комплексов на эндотелии приводит к развитию «болезней иммунных комплексов » - с активацией системы комплемента, нейтрофилов, разрушением собственных тканей.

Изображение слайда
69

Слайд 69: Состав иммунных комплексов

Заболевание Антигены Антитела СКВ ДНК, нуклеопротеины IgG, IgM, IgA гепатит HBs -антиген IgG, IgM Сифилитическая нефропатия антигены Tr. pallidum IgG Карцинома ЖКТ Карциноэмбриона льный антиге IgG, IgM Бактериальный эндокардит/гломерулонефрит стрептококковые антигены IgG

Изображение слайда
70

Слайд 70: Уровни иммунных комплексов у здоровых лиц

Возраст 3 – 5 лет 6 – 8 лет 9 – 11 лет старше 12 лет ЦИК, % 59 - 112 48 - 96 49 - 100 51 - 120

Изображение слайда
71

Слайд 71: Определение компонентов системы комплемента в сыворотке крови методом ИФА (мкг/мл)

C1q 100 – 250 C3 700 – 1800 C3a 0.05 – 0.15 C4 200 – 500 C5a 0.01 – 0.03 C1 -ингибитор 150 - 350

Изображение слайда
72

Слайд 72

Основные иммунологические показатели при инфекционно-воспалительных заболеваниях 72

Изображение слайда
73

Слайд 73: Биологический материал для определения концентрации цитокинов ( мультиплексный анализ)

Периферическая кровь сыворотка крови плазма крови (ЭДТА) Биологические жидкости цереброспинальная жидкость секреты смывы моча лаважная жидкость Экстракты тканей

Изображение слайда
74

Слайд 74

Анализ на микросфере ELISA (ИФА на планшетах) ELISA (ИФА) на бусине Технология xMAP xMAP Анализ на плоскости

Изображение слайда
75

Слайд 75: xMap технология

100 классов = 100 тестов xMap технология xMap микросферы Проточный цитофлуориметр Проточная система и кювета Двухлазерная компоновка Детекция флюоресцентного сигнала Карта микросфер ( регионы ) Каждый класс микросфер картируется 100 регионов

Изображение слайда
76

Слайд 76: Схема эксперимента

Смешать образцы, стандарты, контроли и микросферы с пришитыми к ним первичными антителами 3. Детекция: стрептавидин-ФЭ Инкубация 30 мин 2. Добавить детектирующие биотинилированные антитела Инкубация 10 мин 4. Считывание результатов в приборе Био-Плекс 200 Анализ цитокинов – за 3,5 часа Между каждым этапом - промывка Bio-Plex Pro Wash Station Инкубация 30 мин

Изображение слайда
77

Слайд 77: Приборы для х-МАР технологии

Luminex-100 Luminex-200 MAGPIX Luminex FLEXMAP 3D

Изображение слайда
78

Слайд 78: Анализ цитокинов

Гемопоэтическая : IL-1 β, IL-6, G-CSF, GM-CSF, IFN γ Аутоиммунная : IL-1 β, IL-6, IL-12, TNF α Воспалительная : IL-6, IL-8, G-CSF, TNF α Th1/Th2: IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, GM-CSF, IFN γ, TNF α 17-плексная : IL-1 β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, G-CSF, GM-CSF, IFN γ, TNF α, MCP-1, MIP-1 23-плексная : IL-1 α, IL-2R, IL-3, IL-12(p40), IL-16, IL-18, CTACK, GRO- α, HGF, ICAM-1, M-CSF, IFN- α 2, LIF, MCP-3, MIF, MIG, β NGF, SCF, SCGF- β, SDF-1 α, TNF- β, TRAIL, VCAM-1 27-плексная : IL-1 β, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-15, IL-17, Basic FGF, Eotaxin, G-CSF, GM-CSF, IFN- γ, IP-10, MCP-1 (MCAF), MIP-1 α, MIP-1 β, PDGF-BB, RANTES, TNF α, VEGF

Изображение слайда
79

Слайд 79: Диагностические возможности

Скрининг на широкий спектр биомаркеров Цитокины и факторы роста (126 показателей ) Белки сигнальной трансдукции (50 показателей ) Специализированные панели на патологические состояния Острая фаза (9 показателей ) Онкопанель (16 показателей) Ангиогенез (9 показателей ) Диабет (26 показателей ) Изотипирование АТ (7 показателей ) Прецизионная цитокиновая панель Pro (10 показателей )

Изображение слайда
80

Слайд 80: Метод ИФА - реагенты фирмы Dr.Fooke, Германия

Изображение слайда
81

Слайд 81: Аллергодиагностика (в том числе в стоматологии)

Определение общего и специфических иммуноглобулинов класса Е: Определение специфических IgE к разнообразным аллергенам (пищевым, пыльцевым, бытовым, грибковым и др.). Определение иммуноглобулинов класса Е к лекарственным препаратам. Определение иммуноглобулинов класса Е к зубопротезным материалам.

Изображение слайда
82

Слайд 82: Показатели гуморального иммунитета в зависимости от возраста (Ig Е, МЕ / мл, 1 МЕ/мл = 2.4 нг (1968 г., ВОЗ)

Возраст Границы нормы новорожденные 0.09 – 0.53 3 месяца 0.39 – 1.76 6 месяцев 1.09 – 6.69 1 год 1.67 – 7.29 4 года 3.03 – 24.31 7 лет 3.63 – 45.60 10 лет 4.28 – 116.2 взрослые 39.6 – 144.6

Изображение слайда
83

Слайд 83: ImmunoCAP® - «золотой стандарт» аллергодиагностики in vitro

В аллергодиагностике оборудование и реагенты к нему играют основную роль для получения качественных результатов. Для этих целей используется технология ImmunoCAP ® (оборудование и аллергены) фирмы " Phadia «(Швеция), являющейся мировым лидером в данной области.

Изображение слайда
84

Слайд 84: ImmunoCAP® : иммунофлюоресцентный метод

Связывающая способность : в технологии ImmunoCAP® твёрдой фазой является трёхмерная активированная целлюлозная губка, которая связывается с антителами по всему объёму. Другие технологии, такие как активированные лунки планшета, активированные шарики и активированные бумажные диски для связывания используют поверхность, чем обусловлена их значительно меньшая связывающая способность.

Изображение слайда
85

Слайд 85: Основные принципы оценки иммунограммы

Комплексность оценки: иммунограмма – набор тестов, позволяющих оценить различные звенья иммунной системы. 2. Сравнительная характеристика изменений показателей всех звеньев иммунной системы (фагоциты, Т- звено,В - звено,гуморальные факторы).

Изображение слайда
86

Слайд 86: Основные принципы оценки иммунограммы

3. Оценка наиболее выраженный сдвигов иммунологических параметров: сопоставление полученных показателей у больного с величиной нормальных значений, полученных при обследовании здоровых лиц (обязательно использовать «возрастные» нормы). 4. Изучение иммунологических показателей в динамике заболевания и в сопоставлении с данными других исследований (микробиологичес ких, вирусологических).

Изображение слайда
87

Слайд 87: Основные принципы оценки иммунограммы

5. Ведущим в анализе иммунограммы является характеристика клинических симптомов (анализировать иммунограмму должны совместно - лечащий врач и врач клинической лабораторной диагностики). 6. Постановку диагноза «иммунодефицитное состояние» и назначение адекватной иммунотерапии после проведения иммунологического обследования проводит только лечащий врач, а не врач –лаборант, который может лишь фиксировать изменения в отдельных звеньях иммунной системы.

Изображение слайда
88

Слайд 88: Основные виды патологии иммунной системы

Количественная или функциональная недостаточность того или иного звена иммунитета ( иммунодефици тные состояния). Нарушения в распознавании антигена иммунной системой (аутоиммунные заболевания). Гиперреактивный или измененный тип иммунного ответа (аллергические заболевания)

Изображение слайда
89

Слайд 89: Вопросы

Какие звенья иммунной системы изучаются в клинической практике? Какие методы иммунного анализа вам известны? Как происходила эволюция методов иммунного анализа? Каковы основные принципы оценки иммунограммы? Каковы возрастные особенности иммунологических показателей? Дайте определение понятию «иммунодефицитные состояния». Какие механизмы лежат в основе развития аутоиммунной патологии? Какие виды гиперчувствительности Вам известны? Какие виды аллергических заболеваний вам известны? Перечислите основные клетки-эффекторы аллергии.

Изображение слайда
90

Слайд 90: Тестовые вопросы

В лабораторной диагностике в зависимости от детализации анализа отклонений тесты иммунного анализа подразделяются на: тесты I уровня тесты I I уровня тесты I I I уровня тесты IV уровня тесты уровня Объектом иммунологических исследований могут служить: кровь слюна мокрота спинномозговая жидкость жидкость бронхоальвеолярного лаважа

Изображение слайда
91

Слайд 91: Тестовые вопросы

К современным методам иммунного анализа не относятся: Иммуноферментный анализ Иммунофлюоресцентный анализ Иммунофенотипирование Хемилюминесцентный анализ Методы розеткообразования Моноклональные антитела получают: При иммунизации лабораторных животных разными антигенами Путем слияния нормальных продуцирующих антитела В-лимфоцитов с опухолевой линией клеток и образованием гибридом Путем замораживания плазматических клеток С помощью фракционирования клеток С помощью центрифугирования клеток на градиенте плотности (р=1.0770)

Изображение слайда
92

Слайд 92: Тестовые вопросы

В каком возрасте начинают проявляться врожденные иммунодефицитные состояния гуморального звена? В возрасте 2 недель В возрасте 1 месяц В возрасте 2 месяца В 3-месячном возрасте В возрасте от 4 месяцев Какие из перечисленных причин иммунодефицитных состояний не относятся к первичным: Нарушение активности или отсутствие фермента Отсутствие какой-либо популяции клеток иммунной системы При дефектах генов, кодирующих молекулы адгезии Иммунодефицитные состояния, вызванные вирусами Иммунодефицитные состояния, вызванные иммунодепрессантами

Изображение слайда
93

Слайд 93: Тестовые вопросы

К основным причинам вторичной иммунологической недостаточности не относится: Белковое голодание Нефротический синдром (гипопротеинемия) Применение иммунодепрессантов Дефекты генов, кодирующих адгезионные молекулы Хрониостресс Какой тип гиперчувствительности лежит в основе развития заболеваний: Атопический дерматит Аллергический ринит Атопическая бронхиальная астма Аллергический конъюктивит Атопическая крапивница

Изображение слайда
94

Слайд 94: Тестовые вопросы

Какие заболевания не относятся к «аллергическим»? Атопический дерматит Аллергический ринит Атопическая бронхиальная астма Аллергический конъюктивит Неиммунологическая крапивница В развитии каких аутоиммунных заболеваний преимущественное участие не принимают механизмы гиперчувствительности I I типа? Аутоиммунная гемолитическая анемия Болезнь Грейвса Миастения гравис Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура Системная красная волчанка

Изображение слайда
95

Последний слайд презентации: Основные принципы оценки иммунной системы. Возрастные особенности. Основные

Изображение слайда