Презентация на тему: NHEJ – негмологичное соединение концов ДНК HDR - homology-directed repair –

NHEJ – негмологичное соединение концов ДНК HDR - homology-directed repair – репарация, направляемая гомологией

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Мегануклеазы Механизм хоуминга с участием мегануклеазы интронов группы I

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Пространственная структура комплекса белка Zif 268 с ДНК. Показаны три домена типа «цинковые пальцы» 5’-GCG-TGG-GCG-3 ’ ДНК Zn 2+ Домен типа «цинковые пальцы» С2 H 2. По два остатка цистеина ( C ) и гистидина ( H) координируют ион Zn 2+. Розовые АК-остатки – взаимодействие с ДНК. 34 а.о.

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

Изображение для работы со слайдом

1/3

Для специфического разрезания ДНК требуется гетеродимеризация двух независимо сконструированных рекомбинантных «цинковых» эндонуклеаз

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Домены типа «цинковые пальцы»

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

ДНК-связывающий домен состоит из трех субдоменов D1-D3 и нуклеазного домена, соединенные линкерным сегментом (красный) Каталитический домен – неспецифическая эндонуклеаза Сайт рестрикции и точки расщепления ДНК

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Активный центр Оба домена обладают похожими элементами вторичной структуры – β -слоями, фланкированными α -спиралями. Активные центры расположены на одном из концов β -слоя (выделены желтым цветом)

Изображение слайда

1/1

В повторах длиной 34 а.о. в положениях 12 и 13 имеются два вариабельных а.о. ( repeat-variable di-residue (RVD) ), которые участвуют в распознавании нуклеотидов ДНК N – Asn, D – Asp, G – Gly, I - Ile

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Сайты первичного процессинга Cas6 PAM – Protospacer Adjacent Motif tracrRNA – trans-encoded CRISPR RNA

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Направляющая РНК

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

PAM – Protospacer Adjacent Motif

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

dCas9 - catalytically dead Cas9

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

1. CRISPR targets Cas9 to create a double stranded break 2. The Nickase system targets a mutant Cas9 to create two adjacent single-strand breaks. 3. TALENs dimerize two FokI units to create a double strand break 4. Zink finger dimerize two FokI units to create DSB Из-за низкой эффективности при гомологичной рекомбинации часто модифицируется один аллель

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Димерные рекомбиназы Cre (фаг P1) или Flp (дрожжи) взаимодействуют со специфическими сайтами loxP или FRT (18-звенные инвертированные повторы, разделенные 8-звенной коровой последовательностью) Гомологичная рекомбинация происходит в 8-звенной коровой последовательности Psp – тканеспецифический (или индуцируемый) промотор loxP/FRT loxP/FRT Реакция обратима

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Структура loxP -сайта Однонаправленная ориентация – вырезание фрагмента Разнонаправленная ориентация – инверсия фрагмента Реакция обратима

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

OSKLN: Oct4, Sox2, Klf4, Lin8 and Nanog

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

Cystic fibrosis (CF) Gaucher's disease (GD)

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

sickle cell disease (SCD ) – СЕРПОВИДНО-КЛЕТОЧНАЯ АНЕМИЯ

Изображение слайда

Изображение для работы со слайдом

1/2

макака- крабоед – cynomolgus monkey ( Macaca fascicularis )

Изображение слайда

1/1