Презентация на тему: Методы выделения и очистки ДНК

Методы выделения и очистки ДНК
План:
Методы выделения ДНК различаются :
Выход ДНК зависит от фазы роста
В зависимости от природы клеточной стенки бактерии могут быть разрушены:
Методы очистки ДНК
Метод фенол-хлороформной экстракции ДНК
Методы выделения и очистки ДНК
Щелочной метод выделения плазмидной ДНК
Выделение ДНК с использованием сорбентов
Методы выделения и очистки ДНК
Выделение ДНК на микроколонках
Методы выделения и очистки ДНК
1/13
Средняя оценка: 4.3/5 (всего оценок: 65)
Код скопирован в буфер обмена
Скачать (1676 Кб)
1

Первый слайд презентации: Методы выделения и очистки ДНК

Лабораторная работа №7 по «Генетике прокариот» Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное бюджетное государственное образовательное учреждение высшего образования « Оренбургский государственный университет» Химико-биологический факультет Кафедра биохимии и микробиологии Давыдова Ольга Константиновна, к.б.н., доцент

Изображение слайда
2

Слайд 2: План:

Параметры выделения ДНК Выделение ДНК из бактериальных клеток Фенольный метод Щелочной метод Выделение с использованием сорбентов Выделение на микроколонках

Изображение слайда
3

Слайд 3: Методы выделения ДНК различаются :

а) чистотой конечного продукта б) временем, необходимым для его получения в) применимостью для выделения больших (или, напротив, небольших) количеств продукта

Изображение слайда
4

Слайд 4: Выход ДНК зависит от фазы роста

Выход из культур, находящихся в стационарной фазе часто оказывается ниже, чем из культур в логарифмической фазе

Изображение слайда
5

Слайд 5: В зависимости от природы клеточной стенки бактерии могут быть разрушены:

1) с помощью одного лишь детергента 2) с использованием сочетания действия детергентов и гидролитических ферментов или 3) с помощью физических методов, таких как разрушение под действием ультразвука, в результате резкого изменения давления или при встряхивании со стеклянными шариками

Изображение слайда
6

Слайд 6: Методы очистки ДНК

После лизиса клеточного материала образуется мультикомпонентная смесь, содержащая, в том числе, ДНК. В связи требуется очистка целевой ДНК: 1) Очистка раствора с помощью методов органической экстракции (с помощью фенола, хлороформа) с последующим осаждением ДНК спиртами и растворением в воде 2) Дифференциальная сорбция ДНК на твердом носителе (чаще всего силикагели с повышенным отрицательным зарядом или модифицированной поверхностью), после нескольких стадий отмывки сорбента с локализованной на его поверхности ДНК органическими растворителями ДНК смывается водой

Изображение слайда
7

Слайд 7: Метод фенол-хлороформной экстракции ДНК

Изображение слайда
8

Слайд 8

Белки экстрагируют смесью фенола, хлороформа, изоамилового спирта. Поскольку плотности этих органических растворитлей отличны от плотности воды, при центрифугировании лизата клеток, к которому были добавлены фенол и хлороформ, образуется два отдельных слоя: нижний, представляющий собой раствор на основе органических растворителей, и верхний, содержащий водный раствор. При этом белки денатурируют и образуют преципитат, который располагается узкой полосой на границе водной и органической фаз. Если фенол был уравновешени буфером с нейтральным значением рН, то водная фаза будет содержать сразу и ДНК, и РНК. Если же фенол был уравновешен буфером, имеющим кислое значение рН, то ДНК окажется в нижнем, органическом слое, а РНК - в верхнем, водном. Далее используют осаждение ДНК этанолом (изопропанолом).

Изображение слайда
9

Слайд 9: Щелочной метод выделения плазмидной ДНК

В ходе эксперимента изменяют pH раствора, содержащего геномную и плазмидную ДНК, на щелочной. При таком значении pH вся ДНК денатурирует. Однако цепи двуцепочечной плазмидной ДНК при этом остаются связанными друг с другом, поскольку плазмиды имеют кольцевую форму. При дальнейшей ренатурации, которая инициируется изменением pH раствора до первоначального, длинные цепи геномной ДНК, успев разойтись в растворе при денатурации, образуют плотный неструктурированный комок, а цепи плазмидной ДНК успешно восстанавливают исходную структуру. Теперь плазмидную ДНК легко отделить от геномной ДНК в ходе центрифугирования.

Изображение слайда
10

Слайд 10: Выделение ДНК с использованием сорбентов

Изображение слайда
11

Слайд 11

Изображение слайда
12

Слайд 12: Выделение ДНК на микроколонках

Изображение слайда
13

Последний слайд презентации: Методы выделения и очистки ДНК

Экстракция ДНК в домашних условиях http://www.examen.ru/add/School-Subjects/Natural-Sciences/Genetics/7672/7694 Лаборатория в домашних условиях http://www.vokrugsveta.ru/vs/article/7872/ Биохакинг http://theoryandpractice.ru/posts/7618-biokhacking

Изображение слайда