Презентация на тему: Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия

Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия
1/35
Средняя оценка: 4.5/5 (всего оценок: 80)
Код скопирован в буфер обмена
Скачать (84966 Кб)
1

Первый слайд презентации: Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия

Елена Евгеньевна Воронежская, Институт биологии развития им.Н.К.Кольцова,РАН Москва 201 6

Изображение слайда
2

Слайд 2

20 µ m 5HT α Tub Трохофора Phyllodoce From Voronezhskaya et al., Comp Neurol, 200 3 Иммуноцитохимия – качественный высокочувствительный метод Шаг вперед – сочетание ИЦХ с лазерной сканирующей микроскопией

Изображение слайда
3

Слайд 3

форму структуры количество структур взаиморасположение структур - По локализации антигена можно оценить : В настоящее время производители предлагают тысячи специфичных антител.

Изображение слайда
4

Слайд 4

Форма основных нервных стволов количество 5-HT нейронов 5 2 h норма 5 2 h 5HTP 100 mM 5 2 h 5HTP 1 mM 5HT α Tub Развитие Platynereis dumerilii

Изображение слайда
5

Слайд 5

Количество делящихся клеток, митотический индекс

Изображение слайда
6

Слайд 6

From Sans et al., Nature Cell Biology, 200 5 Подсчет числа синапсов

Изображение слайда
7

Слайд 7

Лазерный сканирующий микроскоп позволяет увидеть структуры в объеме (3D )

Изображение слайда
8

Слайд 8

Дополнительная обонятельная луковица головастика Xenopus laevis. ( Препарат Л.П.Незлина Подробно см. Nerzlin et al. 2003) Двойное трассирование обонятельный нерв пероксидаза хрена- TRITC обонятельный тракт биоцитин - Alexa488

Изображение слайда
9

Слайд 9

Митральные клетки обонятельной луковицы головастика Xenopus laevis. Инъекция биоцитина в ольфакторный тракт (выявление авидин - TRITC), совмещенное с иммунореакцией против GABA (Alexa-488). Препарат Л.П.Незлина Трассирование, совмещенное с иммунореакцией

Изображение слайда
10

Слайд 10

Изображение слайда
11

Слайд 11

Выбор флуорохрома : не слишком близкие но и не слишком далекие спектры Контроли: позитивная и негативная колокализация, автофлуоресценция, одиночное маркирование Тщательный подбор параметров микроскопирования и сканирования: объектив, разрешение сканирования, минимизация шума, полный динамический диапазон яркости, подбор яркостей по разным каналам Требования

Изображение слайда
12

Слайд 12

С любезного разрешения Dr.K.Glebov, INSERM Экстраклеточный эпитоп рецептора Внутриклеточный эпитоп рецептора X Z X Z после Деконволюция до

Изображение слайда
13

Слайд 13

Визуальный : RGB overlay Корреляция яркостей точек (пикселей) в разных каналах: scatterplot /2D histogram, Pearson coefficient, Manders coefficient Анализ

Изображение слайда
14

Слайд 14

Локализация рецептора в липидных доменах мембраны 5HT1-YFP GM1(CTX) merge From Glebov et al, Mol. Pharm., 2007

Изображение слайда
15

Слайд 15

Минимальный размер видимого объекта около 200 nM (для систем со сверхвысоким разрешением около 50 nM ). Всё, что меньше, воспринимается как единая структура ОГРАНИЧЕНИЯ Можно увидеть наличие, но нельзя оценить активность.

Изображение слайда
16

Слайд 16

20 m m From Lambert and Nagy, Dev. Biol., 2003 Различие в структуре активного и неактивного фермента позволяет различать их иммуноцитохимически Дифосфорилированная МАРК в развитии аннелид моллюсков Nezlin, Voronezhskaya, 200 5 Diphospho-rylated MAPK DAPI

Изображение слайда
17

Слайд 17

Фосфо - S10 и Фосфо - S28 H3 гистон ассоциированы с различными фрагментами хроматина в делящемся ядре From Dyson et al., Journal of Cell Science, 200 5

Изображение слайда
18

Слайд 18

Иммуноцитохимия – качественный высокочувствительный метод НО: в сочетании с конфокальным микроскопом, который является высокоточным измерительным прибором, ИЦХ позволяет осуществлять и количественные измерения Лазерный сканирующий микроскоп дает экспериментатору дополнительные преимущества : высокая чувствительность, стандартные условия наблюдения/измерения, возможность визуализации в тотальном препарате.

Изображение слайда
19

Слайд 19

Количество волокон в стриатуме, иммунопозитивных к тирозингидроксилазе контроль низкая концентрация MPTP высокая концентрация MPTP С любезного разрешения акад. М.В.Угрюмова, Лаб. нейрогуморальной регуляции ИБР РАН

Изображение слайда
20

Слайд 20

pCPA 5HT α Tub From Voronezhskaya et al., Development, 200 4 Клетка апикального органа личинки моллюска

Изображение слайда
21

Слайд 21

Увеличение концентрации антигена путем предварительной инкубации в биохимическом предшественнике 5HT 5HT контроль 5HTP, 1 h норма после 5HTP Зародыш данио, результаты Евгения Ивашкина, ИБР РАН

Изображение слайда
22

Слайд 22

норма дофамин L-DOPA Анализ синтеза и транспорта медиатора Личинка морского ежа, результаты Александры Обуховой, ИБР РАН Флуоресценция катехоламинов после формальдегид-глутаральдегидной фиксации

Изображение слайда
23

Слайд 23

Синтез и транспорт серотонина в бластомерах Зародыш прудовика, результаты Евгения Ивашкина, ИБР РАН

Изображение слайда
24

Слайд 24

Эксперименты по трансплантации фрагментов эмбрионального мозга мышей Выполнены к.б.н. О.В.Подгорным, к.б.н. К.К.Сухиничем лаб нейробиологии развития, ИБР РАН

Изображение слайда
25

Слайд 25

Трансплантаты. 7 дн 30 дн 30 дн 7 дн 30 дн GFP GFP GFP GFP GFP

Изображение слайда
26

Слайд 26

Тр Тр Тр GFAP GFAP GFP GFP merge merge Глиальная дифференцировка клеток в трансплантатах 30 суток 7 суток

Изображение слайда
27

Слайд 27

Результаты Евгения Ивашкина, Каролинский институт Маркирование дробящихся бластомеров dextran

Изображение слайда
28

Слайд 28

TMR -декстран 5-НТ 31 ч Контроль Инъекция 5- HT на стадии 2 бластомеров Результаты Евгения Ивашкина, Каролинский институт Повышение уровня 5- HT в ранних дробящихся зародышах модулирует 5- HT в ЦНС личинок

Изображение слайда
29

Слайд 29

TMR -декстран или 5- HT + TMR -декстран TMR -декстран 5- HT + TMR -декстран 58 ч TMR -декстран 5-НТ Результаты Евгения Ивашкина, Каролинский институт

Изображение слайда
30

Слайд 30

From Livet et al., Nature, 200 7

Изображение слайда
31

Слайд 31

From Livet et al., Nature, 200 7

Изображение слайда
32

Слайд 32

Лазерный сканирующий микроскоп и современные маркеры дают экспериментатору возможность наблюдать за структурами в живом объекте

Изображение слайда
33

Слайд 33

Изображение слайда
34

Слайд 34

Современные методы флуоресцентной и лазерной сканирующей микроскопии дают такие возможности для экспериментальной работы, которые совсем недавно нам просто и не снились!

Изображение слайда
35

Последний слайд презентации: Иммуноцитохимия как инструмент оценки результата экспериментального воздействия

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!

Изображение слайда